Phản ứng chuỗi trùng hợp (PCR) là một kỹ thuật sinh học phân tử được sử dụng để khuếch đại một hoặc một vài bản sao của một đoạn DNA theo cấp lũy thừa, tạo ra hàng ngàn đến hàng triệu bản sao của một trình tự DNA nào đó.
Được phát triển năm 1983 bởi Kary Mullis, PCR là một kỹ thuật phố biến và không thể thiếu trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu y học và sinh học với nhiều ứng dụng khác nhau như nhân bản ADN để giải trình tự, nghiên cứu quá trình phát sinh chủng loại dựa trên bằng chứng về ADN, hoặc phân tích chức năng của gen; chẩn đoán các bệnh di truyền; xác định các dấu vân tay ADN (sử dụng trong khoa học pháp y và xác định quan hệ huyết thống ); phát hiện và chẩn đoán các bệnh truyền nhiễm. Năm 1993, Mullis được trao giải thưởng Nobel Hóa học cùng với Michael Smith cho nghiên cứu của mình về PCR.
Phương pháp PCR dựa trên chu kỳ nhiệt, bao gồm các chu kỳ tăng giảm nhiệt độ trong phản ứng biến tính ADN và tái bản ADN. Đoạn mồi (là đoạn ADN ngắn) mang các trình tự bổ sung với trình tự ADN đích và ADN polymerase là những thành phần quan trọng cho phép khuếch đại một cách chọn lọc và lặp lại. Khi quá trình PCR diễn ra, ADN mới được tạo ra từ ADN khuôn ban đầu sẽ tiếp tục được sử dụng làm khuôn để tổng hợp phân tử ADN tiếp theo, tạo thành chuỗi phản ứng dây chuyền trong đó các mẫu DNA được khuếch đại theo cấp số nhân.
Hầu như tất cả các kỹ thuật PCR sử dụng một ADN polymerase bền nhiệt, như Taq polymerase (enzyme có nguồn gốc từ vi khuẩn Thermus aquaticus). ADN polymerase này có hoạt tính lắp ráp tổng hợp sợi ADN mới từ các đơn phân nucleotide bằng cách sử dụng khuôn ADN sợi đơn và các đoạn ADN oligonucleotide ( hay còn gọi là ADN mồi), đây cũng là các thành phần bắt buộc để bắt đầu quá trình tổng hợp DNA. Phần lớn các phương pháp PCR sử dụng chu trình nhiệt, nghĩa là, tiến hành xen kẽ quá trình gia nhiệt và giảm nhiệt các mẫu PCR thông qua một chuỗi các giai đoạn nhiệt khác nhau được xác định.
Ở bước đầu tiên, hai sợi xoắn kép của ADN được tách ra ở nhiệt độ cao, quá trình được gọi là quá trình biến tính ADN. Ở bước thứ hai, nhiệt độ được hạ xuống và hai sợi ADN trở thành khuôn cho ADN polymerase tổng hợp đoạn ADN đích. Khả năng khuếch đại chọn lọc là do việc sử dụng mồi mang trình tự bổ sung với đoạn ADN đích khuếch đại dưới những chu trình nhiệt đặc hiệu.
Thông thường, PCR bao gồm một chuỗi khoảng 20-40 lần biến đổi nhiệt độ lặp đi lặp lại, gọi chu kỳ, mỗi chu kỳ thường gồm 2-3 giai đoạn nhiệt độ riêng biệt, thường là ba. Các chu kỳ thường bắt đầu bằng giai đoạn nhiệt độ cao (>90°C), và sẽ dừng lại khi sản phẩm cuối cùng được tổng hợp hoặc dừng lại ở nhiệt độ thấp để lưu trữ sản phẩm PCR trong thời ngắn. Nhiệt độ và thời gian thực hiện của mỗi chu kỳ phụ thuộc vào nhiều yếu tố. Những yếu tố này gồm enzyme tổng hợp ADN, nồng độ ion hóa trị hai, dNTPs dùng trong phản ứng, và nhiệt độ nóng chảy (Tm) của mồi.
Giai đoạn khởi đầu: (Chỉ cần đối với những enzyme ADN polymerase bắt buộc phải kích hoạt bằng nhiệt độ). Giai đoạn cần tăng nhiệt độ lên 94-96°C (hay 98°C nếu sử dụng polymerases cực kỳ bền nhiệt) và được tiến hành trong 1-9 phút.
Giai đoạn biến tính: đây là bước đầu tiên của chu kỳ và là quá trình tăng nhiệt độ lên 94-98°C trong 20-30 giây. ADN được biến tính bằng cách phá vỡ liên kết hydro giữa các bazo, tạo thành phân tử ADN sợi đơn.
Giai đoạn gắn mồi: nhiệt độ phản ứng giảm xuống còn 50-65°C trong 20-40 giây để mồi gắn vào sợi ADN đơn. Nhiệt độ này cần phải đủ thấp để cho phép mồi bắt cặp với sợi ADN, nhưng cũng đủ cao cho quá trình bắt cặp đặc hiệu, nghĩa là, mồi chỉ nên gắn hoàn toàn với phần trình tự bổ sung trên mạch khuôn. Nếu nhiệt độ quá thấp, mồi sẽ gắn không đặc hiệu. Nếu quá cao, mồi có thể không gắn. Thông thường nhiệt độ gắn mồi thường thấp hơn 3-5 °C so với Tm của mồi dùng trong phản ứng. Liên kết hydro bền giữa phân tử ADN- ADN chỉ được hình thành khi mồi bổ sung hoàn toàn với khuôn. Polymerase liên kết với các phân tử lai ADN mồi – khuôn và bắt đầu tổng hợp ADN.
Giai đoạn kéo dài: Nhiệt độ trong giai đoạn này phụ thuộc vào các ADN polymerase sử dụng; Taq polymerase có nhiệt độ hoạt động tối ưu ở 75-80°C , và nhiệt độ 72°C thường được sử dụng với enzyme này. Tại giai đoạn này ADN polymerase tổng hợp sợi ADN mới bổ sung với ADN khuôn bằng cách thêm dNTP theo nguyên tắc bổ sung theo chiều 5′ đến 3′, phản ứng trùng ngưng xảy ra giữa nhóm 5′ – phosphate của dNTP với nhóm 3′ – hydroxyl phía cuối của sợi ADN vừa mới được hình thành. Thời gian của giai đoạn kéo dài phụ thuộc vào ADN polymerase và độ dài của đoạn DNA cần khuếch đại. Thông thường, các ADN polymerase có khả năng khuếch đại được hàng nghìn bazo nito trên một phút. Trong điều kiện tối ưu, tức là, nếu không có hạn chế do giới hạn của cơ chất hoặc chất phản ứng thì sau mỗi giai đoạn kéo dài, số lượng ADN được khuếch đại sau mỗi chu kì tuần theo hàm mũ.
Giai đoạn kết thúc kéo dài: Giai đoạn này đôi khi được thực hiện ở nhiệt độ 70-74 °C (đây là nhiệt độ cần thiết cho hoạt động tối ưu của hầu hết các enzyme polymerase dùng trong phản ứng PCR), với thời gian 5-15 phút sau chu kỳ PCR cuối cùng để đảm bảo rằng tất cả ADN sợi đơn còn lại đều được tổng hợp hoàn toàn.
Giai đoạn bảo quản: Giai đoạn này thực hiện ở nhiệt độ 4-15°C trong một thời gian để bảo quản ngắn hạn sản phẩm của phản ứng.
Lê Văn Công
Tài liệu tham khảo:
1. WIKIPEDIA
2. BioMedia VN
👉👉 Để xem được các video và bài viết mới nhất của chúng tôi, hãy đăng ký kênh theo địa chỉ: http://yt3.piee.pw/D3LD5 🎬 Youtube: https://www.youtube.com/labnotes123/?sub_confirmation=1 📡Địa chỉ webbsite: https://labnotes123.wixsite.com/medical 🖱Địa chỉ fanpage: https://www.facebook.com/Labnotes123/ 📕Hiệu sách: https://www.facebook.com/Labnotes123/shop/ #labnotes123
Cá Cược SEA Game ? Kinh Nghiệm Xương Máu Trong Cá Độ SEA Game
Cá cược SEA games cực kỳ hot trong những nhà chiếc bước chân vào thị trường Đông Nam Á đề cập chung và Việt Nam kể riêng. So với những đội bóng không xa lạ thì ko khó để những cược thủ bộc lộ sự hiểu biết và dự báo những kèo cược một phương pháp chuẩn xác để thắng đậm trong những trang web cá độ bóng đá trên mạng.
cùng nhà cái cá cược uy tín nhất việt nam chia sẻ những kinh nghiệm để có 1 mùa cá cược SEAGame trọn vẹn nhé!
Điểm qua về SEA trò chơi – ASIAD
bên cạnh những giải đấu Quốc tế to như FIFA và EURO thì 1 trong các giải bóng đá được toàn thể cược thủ bóng đá Việt thích thú và mong ngóng đó là SEA game. Nhận được tổ chức hai năm 1 lần vào giữa chu kỳ Đại hội Olympic và Đại hội Thể thao châu Á.
Trong đó Bóng đá là 1 phần của môn thể thao Đại hội Thể thao Đông Nam Á kể từ lần năm 1959, đã xong độ tuổi so với đội tuyển nam là U23 cộng so với tối đa ba cầu thủ trên tuổi cho mỗi đội hình.
do đây là một giải đấu khu vực, nên chắc hẳn những cược thủ sẽ chẳng bao giờ bỏ lỡ 1 cơ hội vừa có thể xem đội bóng nhà mình thi đấu giành huy chương vừa đặt cược ủng hộ và lấp đầy túi tiền.
Ngoài ra thì Bộ VH, TT&DL đã cấp phép cá độ hợp lí tại VN một số giải đấu bóng đá quốc tế trong đó bao gồm bóng đá nam và nữ tại ASIAD hay SEA trò chơi.
Vậy đề nghị các cược thủ có thể hòa bình thỏa mãn ưa thích cá cược bóng đá của mình trong các mùa SEAGame, còn chần chờ gì nữa mà không bung mình trong mùa cá cược SEA games.
Kinh nghiệm chơi cá cược SEAGame buộc phải nắm
Đọc kèo chuẩn xác
Đọc kèo chuẩn xác là phương pháp đầu tiên và cũng là bí quyết quan trọng nhất để giúp cho cơ hội chiến thắng ván cược được khả quan hơn khi chơi cá cược SEAGame so với các mẫu kèo tại nhà cái.
Lựa sắm kèo đống ý để cá cược SEA game
ngoài việc phân tích và soi kèo bóng đá thì việc sắm lựa cửa cược cực kỳ quan trong. Bạn bắt buộc nhớ, nhà dòng đã có đội ngũ khoa học chuyên nghiên cứu kèo, phải kết quả mà họ đưa ra có thể là đúng hoặc là kèo dụ. Do vậy, hãy biết bí quyết đọc vị nhà cái chắc tay.
Ví dụ: nếu đội mạnh đá sân khách mức kèo 1/1.5 trái. Những lực lượng thi đấu ko có chênh lệch, do vậy chọn cửa dưới sẽ có xác suất cao hơn.
ví như nhị đội có thực lực cân sức, hãy tìm đội khách đối với kèo đồng banh.
Phân tích thông tin trận đấu trước lúc cá cược SEA games
bên cạnh việc nắm thông tin về tỷ lệ kèo. Bạn cần lưu ý một số yếu tố có thể ảnh hưởng tới trận đấu như: thứ hạng của hai đội bóng, phong độ vừa rồi, lối chơi, lực lượng, tỉ lệ thắng gần đây, HLV,…
Bóng đá là một cuộc chiến gay gắt giữa 2 đội bóng với nhau. Và để giúp cho ván soi kèo của mình diễn ra được suôn sẻ và thuận lợi hơn thì bạn yêu cầu tò mò thông tin kỹ càng cho 2 đội bóng đó.
Chơi ít kèo nhưng hiệu quả nhất
một sai lạc nghiêm trọng mà các thành viên mới lúc tham gia cá độ bóng đá cho rằng: Cứ đặt tiền vào đa dạng các tỉ lệ cược trên trang cá cược bóng đá sẽ tăng mức độ thắng cược của mình lên. Tuy nhiên, phương pháp đó từ những chuyên gia mà nhắc là hoàn toàn sai trái và có thể khiến cho kết quả tỷ trọng cược giảm sút một cách trầm trọng.
Mỗi 1 kèo cược trên nhà mẫu bóng đá uy tín sẽ có phương pháp nhìn nhận trận đấu khác nhau. Chính do đó, việc đặt ra dạng những tỷ trọng kèo sẽ khiến cho bạn dạng thân cảm thấy rối mắt và ko thể nào đưa ra phán đoán chuẩn xác được.
Tỉnh táo để đặt niềm tin vào đội bóng mạnh
Hãy đặt niềm tin vào đội bóng mạnh hơn và có hiệu số bàn thắng cao hơn với đội còn lại để chơi cá cược SEA games. Tuyệt đối ko buộc phải nghe các lời xúi giục từ phía người ngoại trừ hay lựa chọn đội bóng phiên bản thân mình phù hợp và hâm mộ. Vì điều đó sẽ không làm cho kết quả tỉ lệ cược có khả quan và giành chiến thắng. Tuy nhiên game thủ cũng ko cần nên lo sợ, bởi vì Việt Nam cũng là một trong những đội mạnh trong khu vực.
Quản lý tiền cược
bạn buộc phải nhớ khá nhiều cuộc chơi đều có rủi ro cao, ngay cả trong 1 cuộc chơi mà game thủ nắm rõ như cá cược SEA games. Do đó, hãy biết cách quản lý và lên kế hoạch đặt cược cho từng trận đấu. Ko cần chơi tất tay hay dồn tiền vào 1 cửa. Lúc đã thắng hay thua đặt mức dừng đưa ra thì nên có điểm kết thúc.
Đọc thêm tại link vào w88.
tìm những nhà cái uy tín
Cá cược trên mạng nhận được ra đời do sự phát triển của công nghệ kỹ thuật, nhận được cá tổ chức cá cược trên trái đất công nhận và cấp phép hoạt động trên toàn thế giới. Việc bị bắt hay dính dáng đến pháp luật là ko có bởi vì nhà loại rất an ninh và được kiểm duyệt chặt chẽ. Tuy nhiên không hề nhà chiếc nào cũng uy tín, chất lượng dịch vụ cũng rẻ, cái gì càng phát triển nhiều thì sẽ càng có hàng fake mạo, hàng giả ra đời, các nhà cái cá cược cũng không ngoại lệ. Hãy tìm hiểu thật kỹ để tậu cho mình nhà dòng uy tín nhất để sẵn sàng cho 1 mùa cá cược SEAGame thắng to lớn.
chờ đợi hôm nay nhà cái cá cược uy tín nhất việt nam đã giúp bạn bổ sung hành trang lúc chơi cá cược SEA game. Chúc người dùng thắng to trong mùa giải SEAGame và sắm lựa nhận được top nhà cái cá cược uy tín phù hợp nhất cho mình. Trong khi, đừng quên tham gia cổ vũ và đặt cược cho U23 Việt Nam trong thời gian sắp tới!
https://nhacaicacuoccom.blogspot.com/