Phương pháp ELISA trực tiếp được coi là loại đơn giản nhất trong các phương pháp ELISA, kháng nguyên (Antigen- Ag) được hấp phụ lên một tấm nhựa, sau đó một lượng lớn của một loại protein (thường là albumin huyết thanh bò-BSA) được thêm vào để khóa tất cả các vị trí liên kết khác. Trong lúc đó, một loại enzyme sẽ liên kết với một kháng thể trong một phản ứng riêng biệt, phức hợp enzyme- kháng thể này được sử dụng để hấp phụ các kháng nguyên. Sau khi phức enzyme- kháng thể dư thừa bị loại bỏ hết, phức hợp enzyme- kháng thể nào gắn với kháng nguyên sẽ còn lại trên giếng. Bằng cách thêm vào cơ chất của enzyme, tín hiệu phát ra đại diện cho lượng kháng nguyên trong mẫu.
Tuy nhiên, so sánh ELISA trực tiếp với ELISA gián tiếp về mặt kỹ thuật thì thấy, trong ELISA gián tiếp, các bước tiến hành cũng tương tự nhưng có những khác biệt quan trọng và có thêm một bước bổ sung. Sau khi kháng nguyên được hấp thụ vào các đĩa, và sau bước cho BSA, các kháng thể tiếp theo sẽ được thêm vào là các kháng thể có thể nhận diện các kháng nguyên (kháng thể này không gắn enzyme). Sau đó, một kháng thể gắn enzyme đã được chuẩn bị và thêm vào đĩa nhằm phát hiện các kháng thể hấp phụ với kháng nguyên (còn trong ELISA trực tiếp, phức hệ kháng thể- enzyme sẽ trực tiếp hấp thụ với kháng nguyên).
Ưu điểm của phương pháp ELISA trực tiếp
So với các phương pháp ELISA khác, phương pháp này được thực hiện trong thời gian ngắn hơn vì chỉ có một kháng thể được sử dụng và ít bước tiến hành hơn. Điều này có thể được sử dụng để kiểm tra phản ứng kháng thể - kháng nguyên cụ thể, và giúp loại bỏ phản ứng chéo giữa các kháng thể khác.
Nhược điểm của phương pháp ELISA trực tiếp
Các kháng thể chính phải được đánh dấu riêng, nên tốn nhiều thời gian và không linh hoạt khi thực hiện nhiều thí nghiệm.
Ngoài ra, kỹ thuật này có độ nhạy thấp hơn do các tín hiệu được khuếch đại ít hơn, nghĩa là độ nhạy thấp hơn.
Lê Văn Công
Tài liệu tham khảo: Direct ELISA
👉👉 Để xem được các video và bài viết mới nhất của chúng tôi, hãy đăng ký kênh theo địa chỉ: http://yt3.piee.pw/D3LD5
🎬 Youtube: https://www.youtube.com/labnotes123/?sub_confirmation=1
📡Địa chỉ webbsite: https://labnotes123.wixsite.com/medical
🖱Địa chỉ fanpage: https://www.facebook.com/Labnotes123/
📕Hiệu sách: https://www.facebook.com/Labnotes123/shop/ #labnotes123