ELISA gián tiếp là gì?

Phương pháp ELISA gián tiếp bao gồm hai bước ELISA liên quan đến hai quá trình gắn của kháng thể sơ cấp và kháng thể thứ cấp được đánh dấu. Kháng thể sơ cấp được ủ với kháng nguyên và sau đó là ủ với kháng thể thứ cấp. Tuy nhiên, việc này có thể dẫn đến các tín hiệu không đặc hiệu bởi vì xảy ra các phản ứng chéo của kháng thể thứ cấp.

Các bước cơ bản trong ELISA gián tiếp:

1. Các đĩa giếng được ủ với kháng nguyên, rửa và khóa bằng BSA.

2. Thêm mẫu và kháng thể vào và rửa.

3. Enzyme gắn với kháng thể thứ cấp được thêm vào và rửa.

4. Thêm cơ chất, enzyme trên kháng thể tạo ra tín hiệu màu hoặc huỳnh quang.

Ưu điểm của phương pháp ELISA gián tiếp

+ Độ nhạy cao: Nhiều hơn một kháng thể được đánh dấu và gắn trên mỗi phân tử kháng nguyên.

+ Linh động: Nhiều kháng thể sơ cấp khác nhau có thể được dùng với một kháng thể thứ cấp có đánh dấu.

+ Tiết kiệm: Kháng thể thứ cấp được đánh dấu được dùng ít hơn.

Trong phân tích ELISA gián tiếp, kháng thể của mẫu được kẹp theo dạng sandwich ở giữa kháng nguyên trên đĩa và enzyme đánh dấu, liên kết kháng đặc hiệu globulin. Việc thêm cơ chất của enzyme vào tạo ra phản ứng màu. Cường độ màu tỉ lệ thuận với lượng kháng thể của mẫu. Mẫu càng nhiều kháng thể, cường độ màu càng mạnh. ELISA gián tiếp phù hợp cho việc xác định mức độ tổng kháng thể có trong mẫu.

Lê Văn Công

Tài liệu tham khảo: Indirect ELISA